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用酶法测定奶酪和奶酪制品中的柠檬酸含量

发布时间:2019-02-27 点击次数:0

 1.适用范围:

本方法采用酶法,适用于奶酪和加工奶酪制品中柠檬酸含量的测定。
 
2.原理概要:
用下列酶法和生物化学物质对试样的萃取物进行处理。
——用柠檬酸裂解酶(CL)把柠檬酸转化为草酰乙酸盐和醋酸盐;
——在还原烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)存在下,用苹果酸脱氢酶(MDH)和乳酸脱氢酶(LDH)使草酰乙酸盐及其脱羧产品、丙酮酸盐分别催化还原成L-苹果酸盐和L-乳酸盐,并使NADH充分转化为其氧化态(NAD+)。
在340nm处测定试样的吸收 ,可测定NADH浓度的下降,而NADH浓度的下降与柠檬酸含量成正比。
 
3.主要仪器和试剂:
3.1.仪器
常规实验室设备,主要有:分析天平、pH计、烧杯、容量瓶、移液管、量筒、过滤漏斗、滤纸、分光光度计、塑料搅拌棒、水浴。
3.2.主要试剂
除非另作说明,所用试剂应为分析纯,水为蒸馏水、去离子水或同等纯度的水。酶溶液制备要用二次蒸馏水。主要试剂有:三氯乙酸溶液、氢氧化钠溶液(A:浓度为5.0mol/l;B:深度为1.0mol/l;C:浓度为0.1mol/l)、氯化锌溶液、缓冲溶液(pH7.8)、碳酸氢钠溶液、NADH溶液、硫酸铵溶液、苹果酸脱氢酶/乳酸脱氢酶悬浮液、柠檬酸裂解酶溶液、柠檬酸标准溶液。
 
4.过程简述:
4.1.采样
重要的一点是取样应具有代表性,样品在运输或储存时未被破坏或改变。取样可参见ISO 707。
4.2.样品制备
分奶酪、加工奶酪和含其他食品块(如火腿、水果、坚果、香料)的加工奶酪分别进行处理。
4.3.测试
称取1g多制好的试样,精确至0.1mg,浸解放入烧杯中。加入50ml水后制取试样的悬浮液,并全部转入100ml容量瓶中,冷却至约20℃。向悬浮液中加入10ml三氯乙酸,稀释至刻度,并混匀,放置30min。用滤纸对悬浮液进行过滤,撇掉前几毫升滤液。移取25ml滤液至烧杯中,加入氢氧化钠溶液B,用pH计测定,调节溶液pH接近4,再加入氢氧化钠溶液C,使pH接近8。
把烧杯中的液体全部移至100ml容量瓶中,用水稀释至刻度并混匀。用滤纸对悬浮液进行过滤,撇掉前几毫升滤液。
按照给出的测试程序进行测定。
需做核对试验和空白试验。
 
5.精确度:
重复性:同一分析人员用同一设备,短期内用理想实验材料得到的两个独立实验结果,绝对偏差不超过算术平均值的5%。
再现性:两名分析人员在不同实验室,用理想实验材料得到的两个独立实验结果,绝对偏差不超过算术平均值的8%。
 
6.来源:
国际标准化组织,ISO 2963:1997(E)
柠檬酸含量
 
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