把干酪分散在水中，用CCl3COOH沉淀蛋白质。用吡啶和Ac2O处理滤液，在428nm测量黄色柠檬酸络合物的A。

2.仪器和试剂

2.1 仪器

试管——16或18×150mm，带玻璃塞或塑料塞。

2.2 试剂

    (a) 三氯乙酸溶液——1.836M。把300g CCl3COOH溶于H2O，并稀释到1L。

    (b) 柠檬酸标准溶液——0.003252M。把0.9565g柠檬酸三钠盐(C6H5O7Na3·2H2O)溶于H2O并稀到1L。

3.试验过程

3.1.样品的制备

    准确称取约0.5g制备好的样品18-6，18-76和18-77，放在瓷研钵中。用研杵捣碎分散，加少份温水(60—70℃)。用不超过50ml H2O定量转移到100ml容量瓶中。冷却到室温并加40ml CCl3COOH溶液，旋动混合，用水稀释到体积，再重新混合。在室温放置30min，用干坚固的纸过滤。弃去滤液 (≥10ml)直到滤液是清的。

3.2.测定

    移取1ml清滤液放入试管。加1.3ml吡啶，混合，并立即加5.7ml Ac2O。塞住管子，充分混合，并放在32℃H2O浴中。

    30min后，从水浴中取出试管，冷却到室温，干燥并在428nm处相对于空白测量片。根据标准曲线把读数转变为无水柠檬酸的μg。

    无水柠檬酸%=W'/(100×W)

式中W'=从标准曲线得到的无水柠檬酸的微克数，W=样品重。

3.3.标准曲线的绘制

    转移0，4，8，12，16和20ml柠檬酸标准溶液(c)分别放到50ml容量瓶中，加水使各瓶中总体积约为25ml。每个瓶中各加20mlCCl3COOH，旋动混合，用水稀释到体积，再混合。

    从每个容量瓶各取1ml分别放入试管中，制备含0，50，100，150，200和250μg无水柠檬酸的标准。按D进行测定。

    以A对柠檬酸微克做图制作标准曲线。